自備材料：
1、實(shí)驗(yàn)材料：桃子、李子、蘋(píng)果、杏等果實(shí)或其他植物組織
2、研缽或勻漿器
3、離心管、離心機(jī)
4、濾紙或紗布
5、96 孔板
6、酶標(biāo)儀
操作步驟(僅供參考)：
1、花青素提取：
方法一：
①4℃預(yù)冷研缽或勻漿器，以及 Anthocyan Assay Buffer。
編號(hào)
名稱(chēng)
100T
Storage
Anthocyan Assay Buffer
2×500ml
RT
使用說(shuō)明書(shū)
1 份②取植物組織，洗凈，擦干，稱(chēng)取新鮮樣品 0.25g，剪碎，置于研缽或勻漿器中。
③加入 2~3ml Anthocyan Assay Buffer，充分研磨或勻漿后轉(zhuǎn)入 10ml 離心管，用
Anthocyan Assay Buffer 沖洗研缽或勻漿器并轉(zhuǎn)移至離心管，補(bǔ)加 Anthocyan Assay
Buffer 至 8ml。
④4℃避光靜置 20min， 期間搖動(dòng) 2~3 次，然后過(guò)濾至離心管，也可用離心機(jī)
8000r/min 離心 3min，濾液（上清液）即為花青素粗提液。
方法二：
將樣品按上述比例加入提取液中，置于 32℃溫箱浸提 4~8h(期間可搖動(dòng)數(shù)次) ，或室
溫下避光浸提 24h，離心取上清即為花青素粗提液。
2、加樣及測(cè)定：取 96 孔板，用 Anthocyan Assay Buffer 做空白對(duì)照，取花青素提取液
（200~300ul）用酶標(biāo)儀在 530nm 波長(zhǎng)處讀取吸光度值。如果花青素濃度過(guò)高，可以
減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)好能設(shè)置 2 平行孔，求平均值。
計(jì)算：
花青素單位定義：以 OD 值為 0.1 時(shí)的花青素濃度稱(chēng)為一個(gè)單位(U)。計(jì)算方法如下：
組織樣品的花青素含量(U/g)=(A 測(cè)定-A 空白)/(0.1xW)
式中：A 測(cè)定=花青素提取液在 530nm 的 OD 值
A 空白=空白對(duì)照在 530nm 的 OD 值
W=樣品鮮重(g)
亦可用自備的花青素標(biāo)準(zhǔn)品做梯度稀釋(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1mg/ml)，用
Anthocyan Assay Buffer 做空白對(duì)照，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)而計(jì)算出樣品中花青素的含量。
組織樣品的花青素(mg/g)={C×VT}/(W×V1)
式中：C=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求得的測(cè)定管花青素含量(mg/ml)
VT=花青素粗提液總體積(ml)=8
V1=加樣時(shí)所用花青素粗提液的體積(ml)
W=樣品鮮重(g)
液體樣品的花青素(mg/ml)=C×N/V
式中：C=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求得的測(cè)定管花青素含量(mg/ml)
V=加樣時(shí)所用花青素粗提液的體積(ml)
N=稀釋倍數(shù)
注意事項(xiàng)：
1、 為了避免花青素見(jiàn)光發(fā)生變化，操作時(shí)應(yīng)盡量避光，研磨或勻漿應(yīng)盡量縮短時(shí)間。
2、 取樣量、試劑用量應(yīng)根據(jù)花青素含量適當(dāng)調(diào)整。3、 Anthocyan Assay Buffer 應(yīng)密閉保存，避免有效成分揮發(fā)。
4、 如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用分光光度計(jì)測(cè)定。
5、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期：12 個(gè)月有效.
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