普魯士藍染色液（核固紅法）使用說明書
更新時間：2019-05-16 點擊次數(shù)：2410次 含鐵血黃素(Hemosiderin)是一種血紅蛋白源性色素，為金黃色或棕黃色顆粒，因其含鐵，且為金黃色，故稱為含鐵血黃素。當紅細胞被巨噬細胞吞噬后，在溶酶體酶的作用下，血紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質和含鐵的含鐵血黃素。Perls普魯士藍反應(Prussian blue reaction)又稱為含鐵血黃素染色，即經過亞鐵氰化甲和稀酸處理后可以產生藍色，常見于吞噬細胞或間質內，其染色原理在于亞鐵氰化甲溶液使三價鐵離子從蛋白質中被稀鹽酸分離出來，三價鐵與亞鐵氰化甲反應，生成一種不溶解的藍色化合物即三價鐵的亞鐵青化物。
普魯士藍染色用于顯示局部組織內的各種出血性病變，常見于吞噬細胞內，可以很好地區(qū)分含鐵血黃素與其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以保存、不易產生沉淀、應用范圍廣，可以進行復染。該染色液的復染液采用核固紅，是經典、常用的復染液。
操作步驟(僅供參考)：
(一)石蠟切片染色：
1、組織固定于10%中性福爾馬林，常規(guī)脫水包埋。
2、切片厚度4μm，常規(guī)脫蠟至水。
3、蒸餾水水洗 1min。
4、切片入Perls stain(見注意事項2)，浸染15～30min。
5、蒸餾水充分沖洗2～5min。
6、入核固紅染色液，淡染細胞核5～10min。
7、自來水沖洗1～5s。
8、常規(guī)脫水透明，中性樹膠封固
(二)冰凍切片染色：
1、無需脫蠟，直接迅速用蒸餾水沖洗2～3min。
2、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，時間可以相應縮短。
(三)細胞染色：
1、4%多聚甲醛固定10～20min。
2、自來水沖洗2次，每次2min。
3、蒸餾水沖洗2次，每次2min。
4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟，時間可以相應縮短
注意事項：
1、切片脫蠟應盡量干凈。組織固定常采用10%中性福爾馬林，經普通福爾馬林固定后，組織會有損傷。避免使用酸性固定劑，鉻酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。
2、整個操作過程中容器要干凈，避免用金屬鐵制品，洗切片和容器時以蒸餾水為宜，因普通水內含鐵質。Perls stain 染色時，應根據(jù)樣本情況調整著色時間。
3、所有切片都應使用同一個陽性對照切片，選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個很好的對照，包含相當數(shù)量的鐵陽性巨噬細胞(心衰細胞)。
4、冰凍切片和細胞染色，根據(jù)具體情況摸索實驗條件
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