葡聚糖凝膠基本知識！
更新時(shí)間：2017-12-28 點(diǎn)擊次數(shù)：2751次葡聚糖凝膠基本知識！
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠，含有大量的羥基，很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度，因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。
葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細(xì)級的葡聚糖凝膠是用于需要*分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程，可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外，粗級也可用于批量工藝。
葡聚糖凝膠產(chǎn)品用途
利用分子篩作用，進(jìn)行多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定。
交聯(lián)葡聚糖的商品名為Sephndex，不同規(guī)格型號的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯?dāng)?shù)為凝膠得水值的10倍。
葡聚糖凝膠使用方法
1.乙醇浸泡：在室溫下，將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時(shí)，并不斷攪拌以保證凝膠溶脹，用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2.無鹽水浸泡：室溫下，在無鹽水中充分溶脹24小時(shí)，間隙攪拌，以保證凝膠的*溶脹，然后；
3.鹽酸浸泡：在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時(shí)，間隙攪拌，濾干，水洗至中性；
葡聚糖凝膠基本知識！
4.將溶脹好的凝膠脫氣后（真空抽濾或超聲波）根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi)，注意保持濕態(tài)裝柱，并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層；
5.上樣前平衡層析柱至少3-5個(gè)柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止（流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值）；
6.凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積，我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積，視分離情況可以調(diào)整；脫鹽時(shí)上樣量可以達(dá)到20%的柱床體積，柱高的選擇也與分離要求相關(guān)，柱高控制在40-50cm以下，過高的凝膠層會引起的反壓，應(yīng)當(dāng)盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制，脫鹽時(shí)高徑比為5：1即可；
7.洗脫方法：可以用無鹽水，也可以采用上柱時(shí)的緩沖液洗脫；在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化；
8.在位清洗（CIP）凝膠使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以
40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個(gè)柱體積，再以至少三個(gè)柱體積平衡緩沖液再生。
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