信帆生物帶您走進蛋白純化實驗
更新時間：2016-12-19 點擊次數(shù)：1053次固定化金屬親和層析（IMAC）是蛋白純化的常用方法，特別適用于純化多組氨酸（His）標(biāo)簽融合蛋白。金屬離子通過螯合劑（配體）固定到基質(zhì)上，與多組氨酸標(biāo)簽相互作用，有效的螯合樣品中的融合蛋白。氮川三乙酸（NTA）和亞氨基二乙酸（IDA）是商業(yè)化樹脂中經(jīng)常使用的螯合配基。怎樣選擇合適的配基和金屬離子，應(yīng)用于蛋白純化實驗?zāi)兀?/span>
首先，我們比較一下NTA和IDA。NTA是4價結(jié)構(gòu)，IDA是3價結(jié)構(gòu)，NTA比IDA多一個羧甲基。結(jié)構(gòu)上的不同，使得NTA比IDA更穩(wěn)定，能得到更高純度的目標(biāo)蛋白。IDA更小，使得它與基質(zhì)更緊密的結(jié)合，提高了載量，但同時也導(dǎo)致了更多的非目標(biāo)蛋白的結(jié)合，但I(xiàn)DA相對便宜。
一些還原劑會影響IDA、NTA的性能。比如DTT會使金屬離子從IMAC 樹脂上剝落，常常會使樹脂的顏色變?yōu)樽厣籈DTA對配基的影響更大。但實驗顯示，NTA耐受各類化學(xué)試劑的能力明顯優(yōu)于IDA。
總結(jié)起來，選用IMAC純化蛋白前，得先問這幾個問題：
1.蛋白純度、蛋白載量，哪個是你的目標(biāo)？
2.你的樣本中是否包含一些還原試劑如DTT或EDTA？
3.你的預(yù)算是？
如果你只是想得到高的蛋白產(chǎn)量，對純度的要求稍微低點，IDA結(jié)合的樹脂可能是你正確的選擇。如果想zui大限度的減少非特異性結(jié)合，可以使用Zn2+ 或Co2+結(jié)合樹脂。從各類數(shù)據(jù)來看，NTA結(jié)合樹脂都表現(xiàn)出的*性。而Ni-NTA樹脂則相當(dāng)于His標(biāo)簽蛋白純化的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)！
不同的樣本或許純化的條件不盡相同，但以上zui基本的原則不同樣本都是適用的。
信帆生物公司主要代理產(chǎn)品：
ELISA試劑盒：進口ELISA試劑盒,國產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒，大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基：微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清：胎牛血清,人血清,動物血清，NQBB,Hyclone，Gbico原裝血清 。
生物試劑：Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對照品：進口對照品,進口對照藥材,進口標(biāo)準(zhǔn)品.
抗體：一抗,二抗，流式抗體等。
放免試劑盒：進口放免試劑盒，國產(chǎn)放免試劑盒，進口美國鳳凰等放免試劑盒。
實驗室代測服務(wù)：放免代測，WB實驗，免疫組化代測，熒光定量PCR代測，病理細(xì)胞染色代測，生化實驗代測等。
